CRISPR) هڪ ٽئين نسل جي جينوم ايڊيٽنگ ٽيڪنڪ آهي: CRISPR دنيا ۾ انقلاب آڻي ڇڏيو.

ڪلسٽرڊ باقاعده طور تي انٽر اسپيسڊ شارٽ پيلينڊرومڪ ريپيٽس (CRISPR) هڪ ٽئين نسل جي جينوم ايڊيٽنگ ٽيڪنڪ آهي جنهن پنهنجي اعليٰ-ٿرو پُٽ نتيجن سان دنيا ۾ انقلاب آندو آهي. ان کي مختلف حياتياتي بيمارين ۽ انفيڪشن جي علاج لاءِ استعمال ڪيو ويو آهي. مختلف بيڪٽيريا ۽ ٻيا پروڪريوٽس (جهڙوڪ آرڪيا) ۾ فيجز جي خلاف دفاع لاءِ CRISPR/Cas9 سسٽم پڻ آهن. اهو ٻڌايو ويو آهي ته CRISPR/Cas9 تي ٻڌل حڪمت عمليون ٽرپل نيگيٽو بريسٽ ڪينسر (TNBC) جي واڌ ۽ واڌ کي روڪي سگهن ٿيون ممڪن طور تي تبديل ٿيل مزاحمتي جين، ٽرانسڪرپشن، ۽ ايپي جينيٽڪ ريگيوليشن کي نشانو بڻائي. اهي علاج وارا مداخلت شايد TNBC ۾ به ڏٺل دوا جي مزاحمت جهڙن چئلينجنگ مسئلن کي حل ڪرڻ ۾ مدد ڪري سگهن ٿيون. في الحال، سيلز کي نشانو بڻائڻ لاءِ CRISPR/Cas9 پهچائڻ لاءِ مختلف طريقا استعمال ڪيا وڃن ٿا، جهڙوڪ جسماني (مائڪرو انجيڪشن، اليڪٽروپوريشن ۽ هائيڊروڊائنامڪ موڊس)، وائرل (اڊينو سان لاڳاپيل وائرس ۽ لينٽي وائرس) ۽ غير وائرل (لائپوسومز ۽ لپڊ نانو پارٽيڪلز) - ذرات). جيتوڻيڪ TNBC جي ماليڪيولر سببن جي مطالعي لاءِ مختلف ماڊل تيار ڪيا ويا آهن، پر جينوم ايڊيٽنگ ٽولز کي وييو ۾ پهچائڻ لاءِ حساس ۽ ٽارگيٽ طريقن جي کوٽ انهن جي ڪلينڪل ايپليڪيشن کي محدود ڪري ٿي. خلاصو، هي جائزو موجوده ثبوتن جي بنياد تي TNBC لاءِ CRISPR/Cas9 علاج جي ترقي، چئلينجن، حدن ۽ امڪانن جو جامع جائزو وٺندو آهي. اسان اهو پڻ اجاگر ڪريون ٿا ته مصنوعي ذهانت ۽ مشين لرننگ جو ميلاپ TNBC جي علاج ۾ CRISPR/Cas9 حڪمت عملين کي ڪيئن بهتر بڻائي سگهي ٿو.
ڪينسر جي خاصيت بي قابو سيل ڊويزن، سيل سائيڪل چيڪ پوائنٽس جي خلل، ۽ ٽيومر کي دٻائيندڙ جينز (TSGs) ۾ ميوٽيشنز (Matthews et al., 2022) آهي. ڪينسر جي مختلف قسمن مان، سيني جو ڪينسر عورتن ۾ ڪينسر جو سڀ کان عام قسم آهي ۽ دنيا ۾ ان جي موت جي شرح تمام گهڻي آهي (وڪس ۽ وينر، 2019). سيني جو ڪينسر هڪ متفاوت بيماري آهي جنهن ۾ مختلف خاصيتون آهن، جهڙوڪ هسٽولوجيڪل ۽ حياتياتي خاصيتون، ڪلينڪل پيشڪش ۽ رويي، ۽ علاج جو جواب (ويگلٽ ۽ ٻيا، 2010). سيني جي ڪينسر جي درجه بندي سيني جي ڪينسر جي تشخيص ۽ ٽيومر جي اڳڪٿي لاءِ صحيح بصيرت فراهم ڪري ٿي. عام بايو مارڪرز ۽ ڪلينڪوپيٿولوجيڪل خاصيتن جو استعمال سيني جي ڪينسر جي درجه بندي لاءِ مکيه معيار رهيو آهي (Tsang and Tse, 2019). سيني جي ڪينسر جي علاج جي اڳڪٿي ۽ جواب ڪيترن ئي عنصرن کان متاثر ٿئي ٿو، جن ۾ ايسٽروجن ريڪٽر (ER)، پروجيسٽرون ريڪٽر (PR)، انساني ايپيڊرمل گروٿ فيڪٽر ريڪٽر 2 (HER2/neu)، ۽ هسٽولوجيڪل گريڊ، ٽيومر جو قسم، ۽ گريڊ شامل آهن. سائيز ۽ لفف نوڊ ميٽاساسس (التوبيتي، 2020). سيني جي ڪينسر جا پنج اندروني ماليڪيولر ذيلي قسم سڃاڻپ ڪيا ويا آهن، جن ۾ لومينل اي، لومينل بي، HER2-enriched، بيسل-جهڙوڪ، ۽ ڪلاڊين-لو شامل آهن (پراٽ ۽ ٻيا، 2015). TNBC ڪينسر جو هڪ ماليڪيولر ذيلي قسم آهي جيڪو سڀني ER، PR، ۽ HER2 کي ظاهر نٿو ڪري (ين ۽ ٻيا، 2020). اهي پيٿولوجيڪل خاصيتون TNBC سان لاڳاپيل آهن، ان جي تيز ترقي ۽ ڪنهن به ٻئي قسم جي سيني جي ڪينسر جي ڀيٽ ۾ وڌيڪ جارحاڻي نوعيت جي تصديق ڪن ٿيون (فينگ ۽ ٻيا، 2018). اضافي طور تي، پيرو ۽ ٻيا (2000) سيني جي ڪينسر کي ٻيهر درجه بندي ڪرڻ ۽ سيني جي ڪينسر جي پنج اندروني ذيلي قسم جي سڃاڻپ ڪرڻ لاءِ مائڪرو ايري ٽيڪنالاجي استعمال ڪئي (ڪيڊيناس، 2012). بيسل جهڙو سيني جو ڪينسر سيني جي ڪينسر جو هڪ ذيلي قسم آهي جنهن ۾ ٽرپل-منفي فينوٽائپ آهي ۽ تيز ترقي سان لاڳاپيل آهي. اهو ياد رکڻ گهرجي ته سڀئي بيسل جھڙا سينو ڪينسر عام طور تي TNBC طور غلط تشخيص ڪيا ويندا آهن، پر صرف 77٪ TNBC آهن؛ ان جي ابتڙ، TNBC جو 71-91٪ بيسل جھڙا آهن، جيڪو ظاهر ڪري ٿو ته اهي ٻئي قسم جا سينو ڪينسر اوورليپ ٿين ٿا ۽ مختلف درجه بندي جي نمائندگي ڪن ٿا (وانگ ڊي.-وائي. وغيره، 2019). اهو TNBC جي هيٽروجينيٽي کي بيان ڪرڻ جي ضرورت پيدا ڪري ٿو ته جيئن اڳڪٿي کي واضح ڪري سگهجي ۽ موجوده ۽ مستقبل جي علاج لاءِ امڪاني جوابن جي سڃاڻپ ڪري سگهجي. اضافي طور تي، TNBC سڀني سينو ڪينسر جي ڪيسن مان 15-20٪ جو سبب بڻجندو آهي ۽ 50 سالن کان گهٽ عمر جي عورتن ۾ وڌيڪ عام آهي. TNBC ڪيسن جي تقريبن 20٪ ۾ BRCA1 يا BRCA2 ميوٽيشنز رپورٽ ڪيا ويا آهن (Xie et al.، 2017؛ Tzikas et al.، 2017).، 2020). مطالعي اهو پڻ ڏيکاريو آهي ته TNBC ۾ هڪ الڳ مدافعتي مائڪرو ماحول آهي جنهن ۾ ويسڪولر اينڊوٿيليل واڌ جي عنصرن جي اعلي سطح، ٽيومر سان لاڳاپيل ميڪروفيجز (TAMs)، ٽيومر-انفلٽريٽنگ لمفوسائٽس (TILs)، ۽ ٻيا ماليڪيول شامل آهن جيڪي ٽيومر جي واڌ ۽ منتقلي ۾ شامل آهن. تنهن ڪري، TNBC جي مائڪرو ماحول کي سمجهڻ ان جي اڳڪٿي ۽ علاج لاءِ اهم آهي (فين ۽ هي، 2022).
TNBC جي اڳڪٿي جو جائزو وٺڻ ۽ اثرائتي علاج کي يقيني بڻائڻ لاءِ، صحيح تشخيص، خاص طور تي ER، PR ۽ HER2 کي ڳولڻ لاءِ امونوهسٽو ڪيمسٽري (IHC) تي ٻڌل، ۽ سيني جي نوپلازم کي ڳولڻ لاءِ ميموگرافي، اهم آهي. بهرحال، ميموگرافي نيڪروسس ۽ فائبروسس جهڙين اندروني خاصيتن کي مناسب طور تي ظاهر نه ڪري سگهي ٿي (ديپڪ سنگھ وغيره، 2021). جيئن ته خراب پيشنگوئي ۽ تشخيص ڊاڪٽرن کي صحيح دوائون پيش ڪرڻ کان روڪي ٿي (چوڌري، 2020)، TNBC جي مريضن جي سنڀال کي بهتر بڻائڻ لاءِ مختلف حڪمت عمليون استعمال ڪيون وينديون آهن. في الحال، ٻه دوائون، ڊاڪسوروبيسن ۽ سائڪلوفاسفامائيڊ، TNBC جي مريضن ۾ استعمال ڪيون وينديون آهن ۽ سٺا نتيجا ڏيکاريا آهن. ان کان علاوه، ٻيون پلاٽينم دوائون استعمال ڪيون وينديون آهن، جهڙوڪ ڪاربوپلاٽين ۽ سسپلاٽين (سيڪوف وغيره، 2015). ان کان علاوه، PARP inhibitors جهڙوڪ Olaparib، Velaparib، ۽ PF-01367338 کي TNBC جي علاج لاءِ امڪاني ڪيموٿراپي دوائن طور استعمال ڪيو ويو آهي (Ishino et al., 2018). جيئن ته Wnt/b-Catenin، NOTCH، ۽ Hedgehog سگنلنگ رستا TNBC جي واقعن ۽ ترقي ۾ شامل هجڻ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي، انهن رستن ڏانهن دوائن کي نشانو بڻائڻ هڪ اهم حڪمت عملي ٿي سگهي ٿي (Aysola et al., 2013). جيتوڻيڪ سرجري، تابڪاري علاج ۽ ڪيموٿراپي اڄ TNBC جي علاج جو مکيه بنياد رهي ٿي، نئين علاج جي ترقي ۾ اهم ترقي ڪئي وئي آهي جنهن ۾ ٽارگيٽ ٿيل علاج، امونوٿراپي، مختلف CRISPR سان لاڳاپيل جين ايڊيٽنگ اوزار جهڙوڪ Cas9n، dCas9.، CRISPR/Cas12، پرائم ايڊيٽنگ، ۽ CRISPR/Cas9-ٽارگيٽڊ جين ٿراپي شامل آهن. هتي اسان TNBC جي علاج ۾ استعمال ٿيندڙ مختلف CRISPR سان لاڳاپيل جين ايڊيٽنگ اوزارن تي ڌيان ڏينداسين. انهن مان، CRISPR/Cas9 کي وڏي پئماني تي ڌيان ڏنو ويو آهي.
Cas9n، جنهن کي Cas9 نڪيس پڻ چيو ويندو آهي، CRISPR/Cas9 جينوم ايڊيٽنگ سسٽم (گپتا ۽ ٻيا، 2019) مان نڪتل Cas9 پروٽين جو هڪ جينياتي طور تي انجنيئر ٿيل قسم آهي. ان جي اصل شڪل ۾، Cas9 پروٽين ۾ ٻه نيوڪليز ڊومين شامل آهن: RuvC ۽ HNH، جن جو مکيه ڪم ٻنهي DNA اسٽرينڊز جو ڪليويج آهي. جڏهن ته، Cas9n ۾، نيوڪليز ڊومينز مان هڪ، HNH، جينياتي طور تي تبديل ٿي ويندو آهي ۽ غير فعال ٿي ويندو آهي. تنهن ڪري، Cas9n جو HNH ڊومين غير فعال رهي ٿو. صرف RuvC ڊومين فعال رهي ٿو، جيڪو Cas9n کي سنگل ڊي اين اي اسٽرينڊز تي ڪٽڻ يا بريڪ ٺاهڻ جي اجازت ڏئي ٿو (ٽريوينو ۽ ژانگ، 2014). Cas9 جي مقابلي ۾، Cas9n مؤثر طريقي سان آف ٽارگيٽ اثرات کي گهٽائي سگهي ٿو ۽ سيل جي مرمت جي ميڪانيزم کي صحيح طور تي بهتر بڻائي سگهي ٿو. Cas9n کي مختلف مسئلن کي حل ڪرڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو، جهڙوڪ ڊبل اسٽرينڊڊ ڊي اين اي ۾ مخصوص جڳهن تي بريڪ ٺاهڻ. هن مقصد لاءِ، ٻه Cas9n ماليڪيول گڏ ڪيا ويا ۽ گڏجي استعمال ڪيا ويا (Yee، 2016). مخلوط نسب ڪائنيز 3 (MLK3) هڪ مائيٽوجن-فعال پروٽين ڪائنيز آهي جيڪو TNBC ميٽاساسس دوران هڪ اهم ريگيوليٽر طور ڪم ڪري ٿو (ڪرونن ۽ ٻيا، 2012).
MLK3 ڪيترن ئي سگنلنگ رستن کي چالو ڪري سگھي ٿو جيڪي TNBC ميٽاسٽيسس ڏانهن وٺي وڃن ٿا. مثال طور، c-Jun N-ٽرمينل ڪائنس (JNK) رستو سيل جي حرڪت ۽ خارجي سيلولر ميٽرڪس جي خرابي کي منظم ڪري ٿو، ۽ MLK3 JNK رستي کي چالو ڪري ٿو، ان ڪري سيل جي حرڪت کي وڌائي ٿو ۽ ناگوار خاصيتون ڏئي ٿو (Rattanasinchai and Gallo, 2016). MLK3 EMT کي پڻ منظم ڪري ٿو. اهو ڪرڻ لاءِ، اهو سنيل، سلگ ۽ ٽوئسٽ جهڙن ڊائون اسٽريم ٽرانسڪرپشن عنصرن کي چالو ڪري ٿو. اهي عنصر اپيٿيليل مارڪرز جي اظهار کي روڪين ٿا ۽ mesenchymal مارڪرز جي اظهار کي فروغ ڏين ٿا، جنهن جي نتيجي ۾ ميٽاسٽڪ فينوٽائپ (Casalino et al., 2023) جي حصول جو سبب بڻجن ٿا. MLK3 کي ECM ري ماڊلنگ ۽ پروٽيز جهڙوڪ ميٽرڪس ميٽالوپروٽينيز (MMPs) جي چالو ڪرڻ ۾ ڪردار ادا ڪرڻ لاءِ ڏٺو ويو آهي جيڪي ECM کي خراب ڪن ٿا. اهو ٽيومر سيل جي حملي کي آسان بڻائي ٿو ۽ دور دراز هنڌن تي پکڙجي ٿو (Katari et al., 2019). تنهن ڪري، پوئين مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته MLK3 TNBC ۾ هڪ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو. رتناسنچائي ۽ گيلو MLK3 جي ڪردار جو مطالعو ڪرڻ لاءِ TNBC ماڊل استعمال ڪيا ۽ ڏٺائين ته اهو مخصوص سگنلنگ رستن ذريعي ڪينسر جي ترقي کي فروغ ڏئي ٿو. انهن MLK3 کي ايڊٽ ڪرڻ لاءِ CRISPR/Cas9n استعمال ڪيو ۽ TNBC ميٽاسٽيسس ۾ هڪ اهم گهٽتائي ڏٺي (رتناسنچائي ۽ گيلو، 2016).
dCas9، جنهن کي اڪثر غير فعال Cas9 سڏيو ويندو آهي، Cas9 پروٽين جو هڪ تبديل ٿيل نڪتل روپ آهي. فعال Cas9 جي برعڪس، dCas9 ۾ اينڊونڪليئس سرگرمي جي کوٽ آهي، جنهن جي ڪري اهو ڊي اين اي ڊبل اسٽرينڊ بريڪ کي متاثر ڪرڻ جي قابل ناهي. تنهن ڪري، dCas9 کي ڊي اين اي جي ترتيب ۾ ڪنهن به تبديلي يا ترميم کان سواءِ جينوم جي مخصوص علائقن کي صحيح طور تي نشانو بڻائڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو (وانگ ۽ ٻيا، 2016). dCas9 ۾، ٻه اينڊونڪليئس پروٽين، RuvC ۽ HNH، اهم امينو ايسڊ باقيات کي دٻائڻ سان غير فعال ٿي ويندا آهن. (رڪٽر ۽ ٻيا، 2016). ڊي اين اي ڪليويج سرگرمي جي کوٽ جي باوجود، dCas9 جينياتي تحقيق ۽ بايو ٽيڪنالاجي ۾ ڪيترائي اهم ڪردار ادا ڪري ٿو. مثال طور، اهو جينوم جي مخصوص علائقن جي تصور جي اجازت ڏئي ٿو، ٽرانسڪرپشنل ريگيوليشن کي آسان بڻائي ٿو، ۽ ايپي جينيٽڪ تبديلين کي فروغ ڏئي ٿو (بروڪن ۽ ٻيا، 2018).
ٽرانسڪرپشن فيڪٽر ZEB1 (زنڪ فنگر اي-باڪس بائنڊنگ هوميو باڪس 1) ايپيٿيليل-ميسينچيمل ٽرانزيڪشن (EMT) جي وچ ۾ هڪ مخصوص ۽ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو، هڪ سيلولر عمل جيڪو جنين جي ترقي، ٽشو جي مرمت، ۽ ڪينسر جي ترقي دوران ٿئي ٿو. ان ۾ ايپيٿيليل سيلز کي ميسينچيمل سيلز ۾ تبديل ڪرڻ شامل آهي، جنهن جي نتيجي ۾ سيل مورفولوجي، حرڪت، حملي، وغيره ۾ تبديليون اينديون آهن (وو ۽ ٻيا، 2020). ZEB1 ڪيترن ئي ايپيٿيليل مارڪرز کي روڪي ٿو، جهڙوڪ اي-ڪيڊرين ۽ اوڪلوڊين، جيڪي TNBC ۾ ايپيٿيليل سيلز جي سيل-سيل چپکڻ ۽ قطبيت کي برقرار رکڻ جا ذميوار آهن (مورينو-بوينو ۽ ٻيا، 2008). ان کان علاوه، ZEB1 ڪجهه مارڪرز کي چالو ڪري ٿو جهڙوڪ N-ڪيڊرين، ويمينٽين ۽ فائبرونيڪٽين (ڪونرادي ۽ ٻيا، 2014) ۽ سائيٽوسڪيليٽل ريموڊلنگ ۾ شامل جين کي پڻ منظم ڪري ٿو جهڙوڪ Rho GTPases ۽ ميٽرڪس ميٽلوپروٽينيسس (MMPs) (هوانگ). وغيره، 2014). 2022)، ان کان علاوه، اهو مختلف سگنلنگ رستن کي پڻ متاثر ڪري ٿو جهڙوڪ ٽرانسفارمنگ گروٿ فيڪٽر-β (TGF-β)، Wnt سگنلنگ، وغيره، انهي ڪري TNBC ۾ ٽيومر جي حملي ۽ ميٽاساسس کي فروغ ڏئي ٿو (چن وغيره، 2016). ڪيترائي مطالعي ۽ سائنسي ثبوت ظاهر ڪن ٿا ته ZEB1 ۾ TNBC جي ڳولا ۽ علاج جي مداخلت لاءِ هڪ قيمتي ايجنٽ جي طور تي وڏي صلاحيت آهي. هڪ تازي مطالعي ۾، Wariah وغيره هڪ TNBC ماڊل استعمال ڪيو ۽ dCas9 ذريعي ZEB1 جي مڪمل دٻاءُ حاصل ڪيو. ان ڪري، انهن in vivo حالتن ۾ ZEB1 جي تمام گهڻي خاصيت ۽ تقريبن مڪمل روڪٿام جو مشاهدو ڪيو (Wariah وغيره، 2023).
CRISPR/Cas12 هڪ جين ايڊيٽنگ ٽول آهي جنهن کي CRISPR/Cpf1 سڏيو ويندو آهي. اهو CRISPR/Cas سسٽم مان نڪتل آهي، جتي Cas12 جو اصطلاح CRISPR سان لاڳاپيل پروٽين 12 (ڀارت ڪمار وغيره، 2022) ڏانهن اشارو ڪري ٿو، جيڪو مڪمل طور تي Cas9 سان ملندڙ جلندڙ آهي. فرق صرف اهو آهي ته ان ۾ Cas12 پروٽين شامل آهي. Cas9 جي مقابلي ۾، Cas12 ۾ ڪجهه منفرد ڪم آهن جهڙوڪ جين ايڊيٽنگ جي عمل دوران چپچپا سر پيدا ڪرڻ، جڏهن ته Cas9 ڪنوارا سر پيدا ڪري ٿو (وانگ وغيره، 2021). Cas12 جي هي ملڪيت ان جي مخصوص ڊي اين اي مينيپوليشن ٽيڪنالاجي ۾ حصو وٺندي آهي. هڪ پروٽين جي طور تي جيڪو ٽارگيٽ ڊي اين اي کي صحيح طور تي سڃاڻڻ ۽ ڪٽڻ جي قابل آهي، ان ۾ غير معمولي ورسٽائلٽي آهي، جيڪا ان کي مختلف ايپليڪيشنن لاءِ هڪ مؤثر اوزار بڻائي ٿي، جنهن ۾ جين ايڊيٽنگ شامل آهي (Pickar-Oliver and Gersbach, 2019).
ٻين CRISPR قسمن وانگر، CRISPR/Cas12 پڻ TNBC ۾ جين کي ختم ڪرڻ يا چالو ڪرڻ جي قابل آهي، جين کي نشانو بڻائي ٿو جيڪي ان جي پيٿوجينيسس يا علاج جي جواب ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿا (يانگ ۽ ژانگ، 2023). هن عمل کي پورو ڪرڻ لاءِ، هڪ گائيڊ آر اين اي (gRNA) تيار ڪيو ويو جيڪو Cas12 کي ٽارگيٽ جين ڏانهن هدايت ڪري ٿو. هڪ ڀيرو Cas12 پنهنجي ٽارگيٽ سان ڳنڍيل آهي، اهو ڊي اين اي ۾ ڊبل اسٽرينڊ بريڪ متعارف ڪرائي ٿو ۽ ڊي اين اي جي مرمت جي ميڪانيزم کي چالو ڪري ٿو. مرمت جي عمل دوران، غلط نيوڪليوٽائيڊس شامل ٿي سگهن ٿا، جنهن جي ڪري جين ميوٽيشن ۽ ڪم جو نقصان ٿئي ٿو (ژانگ ۽ ٻيا، 2021a). ان کان علاوه، Cas12 اينزائم (dCas12 سڏيو ويندو آهي) جو هڪ بهتر نسخو پڻ جين کي چالو ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو. ان کي ٽرانسڪرپشن ايڪٽيويٽر سان گڏ ڪرڻ سان، ڪجهه جين کي متحرڪ ڪرڻ ممڪن آهي، ان ڪري انهن کي چالو ڪيو وڃي ٿو. هن ٽيڪنالاجي ۾ ٽيومر کي دٻائيندڙ جين جي چالو ڪرڻ ۾ وڏي صلاحيت آهي (سلطان ۽ ٻيا، 2022).
پرائم ايڊيٽنگ هڪ نئين ترقي يافته ۽ انتهائي اعليٰ جينوم ايڊيٽنگ ٽيڪنالاجي آهي. اها ڪنهن جاندار جي ڊي اين اي کي تمام صحيح طريقي سان تبديل ڪرڻ جي قابل آهي (چن ۽ ليو، 2023). پرائم ايڊيٽنگ ٻن مکيه حصن جي انضمام ذريعي حاصل ڪئي ويندي آهي: هڪ تبديل ٿيل CRISPR/Cas9 اينزائم ۽ ريورس ٽرانسڪرپٽيس. CRISPR/Cas9 اينزائم جو ڪردار جينوم ۾ صحيح جڳهن کي چونڊيل طور تي نشانو بڻائڻ آهي، جڏهن ته ريورس ٽرانسڪرپٽيس ڊي اين اي کي ٽارگيٽ جڳهه تي مڪمل طور تي تبديل ڪرڻ ۾ مدد ڪري ٿو (حسن ۽ ٻيا، 2021). پرائمر ايڊيٽنگ ميڪانيزم ۾، پهرين قدم ۾ هڪ پرائمر ايڊيٽنگ گائيڊ RNA (pegRNA) (Standage-Beier ۽ ٻيا، 2021) ٺاهڻ شامل آهي. ان ۾ ٽارگيٽ ڊي اين اي ۾ گهربل ايڊيٽنگ سائيٽ سان لاڳاپيل ٽارگيٽ تسلسل ۽ RNA ٽيمپليٽ شامل آهن. پوءِ pegRNA کي هڪ پرائمر ايڊيٽنگ نيوڪليز (PE2) سان گڏ ٽارگيٽ سيلز ۾ متعارف ڪرايو ويندو آهي. PE2 هڪ فيوزن پروٽين آهي جنهن ۾ هڪ Cas9 اينزائم، هڪ ريورس ٽرانسڪرپٽيس، ۽ هڪ پرائمر ايڊيٽنگ اڊاپٽر شامل آهي (مارٽن-الونسو ۽ ٻيا، 2021). سيل جي اندر، pegRNA ۽ PE2 ڪمپليڪس ان مخصوص ڊي اين اي جي ڳولا ڪندا آهن جنهن کي اهي تبديل ڪرڻ چاهين ٿا. Cas9 اينزائم ڊي اين اي کي ڪٽيندو آهي ۽ هڪ ٽيمپليٽ ٺاهيندو آهي جنهن ۾ سنگل اسٽرينڊ شامل هوندا آهن (چوئي ۽ ٻيا، 2022). ريورس ٽرانسڪرپٽيس هن ٽيمپليٽ کي ڊي اين اي کي ايڊيٽنگ لاءِ تيار ڪرڻ لاءِ استعمال ڪندو آهي. ڊي اين اي جي ڪاپي ڪرڻ سان گڏ، آر اين اي ٽيمپليٽ کي ايڊٽ ڪرڻ لاءِ هدايتون پڻ شامل آهن. آخرڪار، نئين ٺاهيل ڊي اين اي اسٽرينڊ کي ڊي اين اي ۾ وقفي جي مرمت لاءِ ٽيمپليٽ طور استعمال ڪيو ويندو آهي، جنهن جي نتيجي ۾ هڪ تبديل ٿيل ڊي اين اي تسلسل هوندو آهي جنهن ۾ گهربل ترميم شامل هوندي آهي (اوچووا-سانچيز ۽ ٻيا، 2021). پرائمر ايڊيٽنگ ميڪانيزم جينز ۾ وڏي پيماني تي ميوٽيشنز جو سبب بڻجي سگهي ٿو. اهو پوائنٽ ميوٽيشنز، انسرشن، ڊيليٽيشن، ۽ حتي جين جي متبادل کي نشانو بڻائي سگهي ٿو (اينزالون ۽ ٻيا، 2019؛ چن ۽ ليو، 2023). پرائم ايڊيٽنگ پوئين جينوم ايڊيٽنگ ٽيڪنالاجيز جي ڀيٽ ۾ ڪيترائي فائدا پيش ڪري ٿي. انهن ۾ وڌايل درستگي، گهٽ ٿيل آف ٽارگيٽ اثرات، ۽ ڊي اين اي ڊبل اسٽرينڊ بريڪ تي ڀروسو ڪرڻ کان سواءِ ڊي اين اي کي ايڊٽ ڪرڻ جي صلاحيت شامل آهي (اينزالون ۽ ٻيا، 2020).
CRISPR/Cas9 ٽيڪنالاجي اصل ۾ بيڪٽيريا کي پلازمڊ ٽرانسفر ۽ فيج انفيڪشن کان بچائڻ لاءِ تيار ڪئي وئي هئي ۽ بعد ۾ ان کي جينوم ايڊيٽنگ لاءِ هڪ مؤثر آر اين اي تي ٻڌل ڊي اين اي ٽارگيٽنگ ٽول جي طور تي ٻيهر استعمال ڪيو ويو (جيانگ ۽ ڊوڊنا، 2017). ان کان علاوه، CRISPR/Cas9 سسٽم کي بيڪٽيريا ۽ آرڪيئل جينوم جي 50٪ ۽ 87٪ ۾ موجود هجڻ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي، ترتيب وار (ايشينو ۽ ٻيا، 2018). CRISPR/Cas9 ڪنهن به غير معمولي جينياتي تسلسل کي ختم ڪرڻ، داخل ڪرڻ ۽ درست ڪرڻ لاءِ هڪ امڪاني اوزار آهي ان ويوو ۽ ان ويٽرو موڊس استعمال ڪندي (سابٽ ۽ ٻيا، 2021). ان کان علاوه، CRISPR/Cas9 کي دلچسپي جي ٽارگيٽ جينز لاءِ ان جي مخصوص هجڻ جي ڪري موافقت واري مدافعتي نظام جو حصو ڏيکاريو ويو آهي (چن ۽ ژانگ، 2018).
CRISPR/Cas9 ۾ Cas9 ۽ هڪ سنگل گائيڊ RNA (sgRNA) شامل آهن. Cas9 هڪ اينڊونڪليزي آهي جيڪو ڪيترن ئي پروٽين حصن تي مشتمل آهي. ان کان علاوه، Cas9 ۾ منفرد ساختياتي ۽ ڪنفوميشنل خاصيتون آهن (Pacesa et al.، 2022) ڇاڪاڻ ته اهو ٻن لوبن تي مشتمل آهي: سڃاڻپ (REC) ۽ نيوڪليزي (NUC). REC لوب کي وڌيڪ ٽن علائقن ۾ ورهايو ويو آهي: REC1، REC2، ۽ برج هيلائسز (Cromwell et al.، 2018). NUC ۾ ٽي لوب شامل آهن، يعني RuvC (RuvC I، RuvC II، RuvC III)، HNH ۽ پروٽو اسپيسر سان لاڳاپيل موٽف (PAM) انٽراڪشن ڊومين (شڪل 1) (Song et al.، 2016). sgRNA ٻن حصن تي مشتمل آهي، جنهن ۾ CRISPR RNA (crRNA) ۽ ٽرانسڪوڊنگ ننڍو RNA (ٽريسر RNA) (شڪل 1) شامل آهن. sgRNA Cas9 پروٽين کي ڪنيڪسنز سان ڳنڍي ٿو ته جيئن هڪ فعال ڪمپليڪس ٺاهي سگهجي، جنهن کي اثر ڪندڙ ڪمپليڪس پڻ چيو ويندو آهي (رڪٽر ۽ ٻيا، 2012). crRNA هڪ 18-20 نيوڪليوٽائيڊ بيس جوڙو آهي جيڪو ٽارگيٽ ڊي اين اي جي تسلسل کي سڃاڻڻ ۾ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو. ان کان علاوه، crRNA ٽارگيٽ ڊي اين اي سان جوڙو ٺاهي ٿو، ۽ tracrRNA ٽارگيٽ ڊي اين اي کي ڳنڍڻ لاءِ Cas9 نيوڪليئيز لاءِ هڪ اسڪافولڊ طور ڪم ڪري ٿو (منگھوار ۽ ٻيا، 2019). ٻئي طرف، PAM تسلسل ۾ 3 نيوڪليئيڊ آهن، جيڪي اثر ڪندڙ ڪمپليڪس جي ڊي اين اي سان ڳنڍڻ جي تصديق، وضاحت ۽ وچولي ڪن ٿا. Cas9 پروٽين ڪمپليڪس سب يونٽ RuvC ۽ HNH ۾ ڪيٽيليٽڪ سرگرمي آهي (رڪٽر ۽ ٻيا، 2012؛ اسماما ۽ زوڊي، 2021). Cas9 سب يونٽ جو HNH نيوڪليئيز ڊومين crRNA سان لاڳاپيل ڊي اين اي اسٽرينڊ کي ٽوڙي ٿو. RuvC نيوڪليز ڊومين ٻين ڊي اين اي اسٽرينڊز کي ٽوڙي ٿو ۽ ڊبل اسٽرينڊ بريڪ (DSBs) پيدا ڪري ٿو، جنهن کان پوءِ ٻه مختلف ڊي اين اي بريڪ مرمت ميڪانيزم چالو ٿين ٿا (جيانگ ۽ ڊوڊنا، 2017) (شڪل 1).
شڪل 1. CRISPR/Cas9 (A) جو جائزو. CRISPR/Cas9 سسٽم جا جزا: (i). Cas9 اينڊونڪليئس ٽارگيٽ ڊي اين اي تسلسل کي ڪٽڻ جو ذميوار آهي، (ii) هڪ واحد گائيڊ (sg) آر اين اي جيڪو crRNA ۽ tra-crRNA chimeras جي فيوزن مان نڪرندو آهي. (ٻه). Cas9 ۾ ڪيترائي جزا شامل آهن جهڙوڪ Rec I، Rec II، NUC لوب (HNH ۽ Ruv C ذيلي جزا آهن) ۽ PAM انٽراڪشن ڊومين (C) لاڳاپيل ڪمن سان. CRISPR/Cas9 پروٽين ڪمپليڪس ڊي اين اي تسلسل کي غير مڪمل ۽ مڪمل شڪلن (D) ۾ ورهائي ٿو. CRISPR/Cas9 جينوم کي ٽن مرحلن ۾ ايڊٽ ڪري ٿو: سڃاڻپ، ڪٽڻ ۽ مرمت. ٺهيل sg-RNA Cas9 جي رهنمائي ڪري ٿو ۽ مڪمل جزو crRNA ذريعي گهربل تسلسل کي سڃاڻي ٿو. Cas9 5′-NGG-3′ تي PAM تسلسل کي سڃاڻي ٿو ۽ ڊي اين اي کي ڳاري ٿو، هڪ DNA-RNA هائبرڊ ٺاهي ٿو ۽ ڪليويج کي چالو ڪري ٿو. Cas9 جو HNH ڊومين ڪمپليمينٽري اسٽرينڊ کي ٽوڙي ٿو، ۽ RuvC ڊومين غير ڪمپليمينٽري اسٽرينڊ کي ٽوڙي ٿو. CRISPR/Cas9 dsDNA کي ٻن طريقن سان ٽوڙي مرمت ڪري ٿو: نان-هومولوگس اينڊ جوائننگ (NHEJ) ۽ هومولوجي-ڊائريڪٽڊ ريپيئر (HDR). NHEJ هڪ اينزيميٽڪ عمل ذريعي پرڏيهي هومولوگس ڊي اين اي جي غير موجودگي ۾ ڊبل اسٽرينڊڊ ڊي اين اي جي مرمت ڪري ٿو، هڪ غلطي جو شڪار ميڪانيزم جيڪو بي ترتيب ڊي اين اي تسلسل داخل ڪري يا ختم ڪري سگهي ٿو. HDR تمام مخصوص آهي ۽ هومولوگس ڊي اين اي ٽيمپليٽس جي ضرورت آهي.
CRISPR/Cas9-ثالث مرمت جي رستن ۾ غير هم جنس اينڊ جوائننگ (NHEJ) ۽ هومولوجي-ڊائريڪٽڊ مرمت (HDR) ميڪانيزم شامل آهن. NHEJ هڪ غلطي جو شڪار رستو آهي ڇاڪاڻ ته ان ۾ داخل ڪرڻ يا حذف ڪرڻ شامل آهي ۽ مرمت جي ميڪانيزم دوران ڪنهن به نموني جي ضرورت ناهي. اهو معياري پروٽين پيدا ڪرڻ لاءِ بي ترتيب نيوڪليوٽائيڊ استعمال ڪري ٿو (عباسي ۽ ٻيا، 2021). هي مرمت جو نظام چار ڪمپليڪس تي مشتمل آهي جهڙوڪ KU ڪمپليڪس، ڪراس-ڪمپليمينٽنگ پروٽين ڪمپليڪس ٽائپ 4 (XRCC-4)، ڊي اين اي اينڊ پروسيسنگ اينزائم، ۽ پروٽين ڪائنس DNA-PKcs (عباسي ۽ ٻيا، 2021). KU ڪمپليڪس پروٽين ۾ ٻه سب يونٽ آهن، Ku 70 ۽ Ku 80، ۽ NHEJ ميڪانيزم ۾ هڪ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو، ڇاڪاڻ ته مرمت جو ميڪانيزم ٻن سب يونٽن (Ku 70 ۽ Ku 80) کي ٽارگيٽ DNA جي ڪُنڍي يا تقريبن ڪُنڍي سرن سان ڳنڍڻ سان شروع ڪيو ويندو آهي (عباسي ۽ ٻيا، 2021)، زخم جي جڳهه تي ٻين NHEJ سان لاڳاپيل عنصرن کي ڀرتي ڪرڻ لاءِ هڪ اسڪافولڊ طور ڪم ڪندو آهي (يانگ ۽ ٻيا، 2020). XRCC-4 ۽ ​​DNA ليگيس ترتيب وار 334 ۽ 911 امينو ايسڊز تي مشتمل آهن، ۽ XRCC4-DNA ليگيس IV ڪمپليڪس DNA سرن جي ligation کي متحرڪ ڪري ٿو (چٽرجي ۽ ٻيا، 2015). DNA اينڊ پروسيسنگ اينزائم، جنهن کي پولي نيوڪليوٽائيڊ ڪائنس 3′-فاسفيٽ پڻ چيو ويندو آهي، هڪ DNA اينڊ پروسيسنگ اينزائم آهي. اهو DNA ۾ 3′P گروپ کي هٽائي سگهي ٿو ۽ DSB مرمت دوران 5′OH گروپ کي فاسفوريليٽ ڪري سگهي ٿو. ان ۾ ايس ايس بي مرمت جي رستي (چيٽرجي ۽ ٻيا، 2015) استعمال ڪندي سنگل اسٽرينڊ بريڪ (ايس ايس بي) جي مرمت پڻ شامل آهي. پروٽين ڪائنيز ڊي اين اي-پي ڪي سي ايس هڪ ڊي اين اي تي منحصر پروٽين ڪائنيز آهي جيڪو PIKKs (فاسفيٽائيڊلينوسائٽول 3-ڪائنيز سان لاڳاپيل ڪائنيز) ۽ ايٽيڪسيا ٽيلينجيڪٽاسيا ميوٽيڊ (اي ٽي ايم) فيملي جي هڪ ڪيٽيليٽڪ سب يونٽ تي مشتمل آهي، انهي سان گڏ اي ٽي ايم ۽ ريڊ 3 سان لاڳاپيل اي ٽي آر. اسٽرينڊ بريڪ (ڊي ايس بي) ۽ سنگل اسٽرينڊ بريڪ (يو ايٽ ال، 2020؛ پينگ ۽ ٻيا، 2016).
HDR هڪ وڌيڪ صحيح ۽ مناسب مرمت جو طريقو آهي ڇاڪاڻ ته معلومات کي هم جنس DNA ڊپلڪس جي برقرار شڪل استعمال ڪندي نقل ڪيو ويندو آهي، جيتوڻيڪ ان کي ڀيڻ ڪروميٽڊس جي موجودگي جي ضرورت هوندي آهي. اهو مماليا جي سيل چڪر جي S/G2 مرحلي دوران ٿئي ٿو. HDR بنيادي طور تي خمير جي نسلن ۾ ٿئي ٿو، پر NHEJ مماليا ۾ نازڪ آهي (برما وغيره، 2006؛ عباسي وغيره، 2021). مڪمل مرمت جو طريقو شڪل 1 ۾ ڏيکاريو ويو آهي.
جيئن ته TNBC جينياتي ۽ ايپي جينيٽڪ غيرمعموليات جي ڪري ٿئي ٿو، CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي خراب جينومڪ/ايپي جينومڪ غيرمعموليات جي اصلاح هڪ معقول علاج جو طريقو ٿي سگهي ٿو (چن ۽ ٻيا، 2019). ان کان علاوه، سيل-مخصوص ٽرانسڪرپشنل ريگيوليشن ۾ شامل ڪجهه ٽرانسڪرپشن عنصر ڪينسر جي سيلز جي منفرد خاصيتن کي ظاهر ڪري سگهن ٿا، اهو مشورو ڏئي ٿو ته ٽرانسڪرپشنل ريگيوليشن ڪينسر جي علاج لاءِ هڪ بهترين طريقو ٿي سگهي ٿو (ڊروسٽ ۽ ٻيا، 2017). دوا جي ترقي لاءِ ٽامي جي انهن ماليڪيولر خاصيتن، جهڙوڪ جينياتي، ايپي جينيٽڪ ۽ ٽرانسڪرپشنل خرابين کي استعمال ڪرڻ سان ڪلينڪل نتيجا بهتر ٿي سگهن ٿا ۽ اسڪريننگ جي قيمتن کي گهٽائي سگهجي ٿو. CRISPR هڪ امڪاني جين ايڊيٽنگ ٽول آهي جيڪو نه رڳو ڪينسر پيدا ڪندڙ جينومڪ ٽارگيٽ کي ڳولي ۽ سڃاڻي سگهي ٿو، پر انساني سيلز ۾ آنڪوجينز کي ايڊٽ ڪرڻ، دٻائڻ ۽ ايپي جينيٽڪ طور تي تبديل ڪرڻ لاءِ پڻ استعمال ڪري سگهجي ٿو (ٽيبل 1) (احمد ۽ ٻيا، 2021). ٽيومر کي دٻائڻ وارن، آنڪوجينز، ۽ دوا جي مزاحمت سان لاڳاپيل جين کي ڳولڻ لاءِ ڪيتريون ئي CRISPR اسڪرينون ڪيون ويون آهن. مختلف TNBC آنڪوجينز کي ايڊٽ ڪرڻ لاءِ CRISPR/Cas9 جو استعمال شڪل 2 ۾ ڏيکاريو ويو آهي.
شڪل 2. CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي مختلف TNBC آنڪوجينز جي جين ايڊيٽنگ جي نتيجي ۾ ٽيومر جي واڌ ۽ ميٽاساسس گهٽجي ٿو. انهن آنڪوجينز ۾ CDK7، NAT1، UBR5، YTHDF2، ITGA9، CXCR4 ۽ CXCR7، Crypto1، ROR1 ۽ ST8SIA شامل آهن، جيڪي TNBC جي موجودگي ۽ ميٽاساسس ۾ شامل آهن.
ڪينسر سيل جي منتقلي، حملي، ۽ ايپيٿيليل-ميسينچيمل منتقلي (EMT) ITGA9 سان لاڳاپيل آهن. پوئين مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته ITGA9 نوچ رستي ۾ هڪ اهم رانديگر آهي ۽ رابڊوميوسارڪوما ميٽاسٽيسس ۾ هڪ دلچسپ ڪردار ادا ڪري ٿو (مولسٽ ۽ ٻيا، 2020). ان کان علاوه، ITGA9 کي ڪيترن ئي ٽيومر قسمن ۾ مريض جي اڳڪٿي سان ويجهي سان لاڳاپيل مليو، جنهن ۾ سيني جو ڪينسر شامل آهي (وانگ زي. ۽ ٻيا، 2019). ان کان علاوه، ITGA9 جي بايو انفارميٽڪس تجزيي مان ظاهر ٿيو ته TNBC ۾ ان جو اظهار ٻين سيني جي ڪينسر جي ذيلي قسمن جي ڀيٽ ۾ تمام گهڻو وڌيڪ هو. TNBC مريضن ۾ ITGA9 جي بلند سطح ٽيومر ميٽاسٽيسس ۽ ٻيهر ٿيڻ سان لاڳاپيل آهن. CRISPR/Cas9 پاران ITGA9 جي ناڪ آئوٽ جي نتيجي ۾ ڪينسر اسٽيم سيل (CSC) جهڙيون خاصيتون، ٽيومر اينجيوجينيسس، ٽيومر جي واڌ، ۽ TNBC ۾ β-ڪيٽينين جي خرابي کي فروغ ڏيندي ميٽاسٽيسس گهٽجي ويو (وانگ زي. ۽ ٻيا، 2019).
ڪرپٽو-1 TGF-β خاندان جو ميمبر آهي ۽ ابتدائي جنين جي پيدائش، اسٽيم سيل جي سار سنڀال، ۽ ڪينسر ميٽاسٽيسس لاءِ اهم آهي (ايشئي ۽ ٻيا، 2021). Tdgf-1 جي نالي سان پڻ سڃاتو وڃي ٿو، اهو هڪ آنڪوجينڪ GPI-اينڪرڊ سگنلنگ پروٽين آهي جيڪو پرائمري اسٽريڪ، ميسوڊرم ۽ اينڊوڊرم جي ٺهڻ جي ضابطي ۾ شامل آهي، انهي سان گڏ جنين جي پيدائش دوران جسم جي عضون جي ترقي ۾ کاٻي/ساڄي عدم توازن جي قيام ۾ (ژانگ ۽ ٻيا، 2021b). اضافي طور تي، ڪرپٽو-1 کي اسٽيم سيل مارڪر جي طور تي ايپيٿيليل-ميسينچيمل منتقلي (EMT) ۾ شامل ڏيکاريو ويو آهي (ژانگ ۽ ٻيا، 2021b). EMT نه رڳو مختلف عملن جهڙوڪ جنين جي ترقي، فائبروسس ۽ زخم جي شفا لاءِ اهم آهي، پر ڪينسر جي حملي ۽ ميٽاسٽيسس لاءِ پڻ. اضافي طور تي، ڪرپٽو-1 کي چار نوچ ريڪٽرز سان لهه وچڙ ڪرڻ ۽ انهن جي پوسٽ-ٽرانسليشنل مئچورٽيشن کي وڌائڻ لاءِ ڏيکاريو ويو آهي (برانڊسٽيٽر ۽ ميلارڊ، 2019). نوچ سگنلنگ رستو انساني سيني جي ڪينسر جي سيلز جي سار سنڀال ۾ شامل هجڻ جي طور تي سڃاتو وڃي ٿو. مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته ڪرپٽو-1 جو CRISPR/Cas9-ثالثي نڪ آئوٽ ڪينسر جي واڌ ۽ ميٽاساسس کي دٻائي ٿو. تنهن ڪري، ڪرپٽو-1 TNBC لاءِ هڪ اهم علاج جو هدف بڻجي سگهي ٿو (ڪاسٽرو ۽ ٻيا، 2015).
XCL12 پروٽين ۽ ان جو ڪيموڪائن ريڪٽر CXC (CXCR4 ۽ CXCR7) ڪينسر سيل جي واڌ ويجهه، واڌ، منتقلي ۽ حملي ۾ مختلف ڪردار ادا ڪن ٿا (وو ۽ ٻيا، 2015). اهي ڪيمو ريسيپٽر TNBC جي ترقي سان لاڳاپيل آهن ڪيترن ئي سگنلنگ رستن ذريعي ان ويوو ۽ ان ويٽرو ماڊلز ۾ (وو ۽ ٻيا، 2015). ان کان علاوه، CXCR4 ۽ CXCR7 جي چالو ٿيڻ TNBC ۾ ميٽاسٽيسس جي وڌيڪ حساسيت ۽ خراب پروگنوسس سان لاڳاپيل آهي (ڪارن ۽ ٻيا، 2022). تنهن ڪري، CXCR4 ۽ CXCR7 جو نڪ آئوٽ شايد TNBC سميت سيني جي ڪينسر جي علاج لاءِ اثرائتي دوا جي ٽارگيٽ جين بڻجي سگهي ٿو. يانگ ۽ ٻين پاران مطالعو. يانگ ۽ ٻين (2019) CRISPR/Cas9 استعمال ڪيو ته جيئن CXCR4 ۽ CXCR7 جين کي گڏ ڪري سگهجي ۽ ڏٺائين ته TNBC جي واڌ ويجهه، واڌ، منتقلي ۽ حملي کي خاص طور تي روڪيو ويو (يونگ ۽ ٻيا، 2019).
miR-3662 جي وڌندڙ سطح، هڪ TNBC آنڪوجين، سيني جي ڪينسر جي ٽشوز ۾ ڏٺو ويو (Yi et al.، 2022). miR-3662 جي ناڪ ڊائون کي سيني جي ڪينسر جي ٽيومر جي واڌ ۽ ميٽاسٽيسس کي روڪڻ لاءِ ڏيکاريو ويو آهي، ٻنهي ۾ ويوو ۽ ان ويٽرو (اگروال ۽ گپتا، 2021). HBP-1 Wnt/-ڪيٽينين سگنلنگ جو هڪ طاقتور روڪيندڙ آهي ۽ ممڪن طور تي TNBC سيلز جي miR-3662-ثالث واڌ لاءِ ذميوار آهي. تازو، Yi et al. اهو معلوم ڪيو ته miR-3662-HBP1 محور TNBC سيلز ۾ Wnt/-ڪيٽينين سگنلنگ رستي کي منظم ڪري ٿو (Yi et al.، 2022). ان جي ٽيومر جي مخصوص اظهار جي ڪري، miR-3662 TNBC لاءِ هڪ امڪاني علاج جو هدف ٿي سگهي ٿو. اهڙيءَ طرح، miR-3662 جو CRISPR/Cas9-ثالثي وارو ناڪ ڊائون TNBC جي علاج لاءِ نئين دوائون تيار ڪرڻ لاءِ هڪ بهترين طريقو ٿي سگهي ٿو.
UBR5 هڪ 300 kDa نيوڪليو فاسفوپروٽين آهي جنهن کي مختلف ڪينسر ۾ ٽيوموريجنيسس، ميٽاسٽيسس، ۽ مدافعتي ردعمل جي هڪ اهم ريگيوليٽر طور سڃاتو ويو آهي (شيئرر ۽ ٻيا، 2015؛ فو ۽ ٻيا، 2023). UBR5 کي TNBC نمونن ۾ انتهائي اپريگيولڊ هجڻ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي ۽ ان جي ubiquitin ligase سرگرمي ذريعي پکيڙ کي وڌائڻ سان ERα فنڪشن کي متحرڪ ڪري ٿو (بولٽ ۽ ٻيا، 2015). پرائمري TNBC نمونن جي پوري ايڪسوم سيڪوئنسنگ مطالعي ۾ پڻ UBR5 جي وڌندڙ اظهار کي ظاهر ڪيو ويو، جيڪو TNBC جي ترقي ۾ ان جي ڪردار جي تجويز ڪري ٿو. اضافي طور تي، UBR5 جي CRISPR/Cas9-driven حذف ڪرڻ TNBC ميٽاسٽيسس جي اهم روڪٿام ۽ تجرباتي ماؤس ماڊلز ۾ واڌ ڏيکاري. ان کان علاوه، جهنگلي قسم جي ماؤس ماڊل ۾ UBR5 جي شموليت ان جي مڪمل ڪارڪردگي کي بحال ڪيو، جڏهن ته هي اثر غير فعال ميوٽنٽ اسٽرين ۾ نه ڏٺو ويو (لياؤ ۽ ٻيا، 2017). UBR5 جي کوٽ خراب اينجيوجينيسس جي ڪري TNBC ۾ اپوپٽوسس، نڪروسس ۽ ٽيومر جي واڌ جي روڪٿام سان لاڳاپيل آهي. UBR5 جي نقصان جي ڪري، ٽيومر جي ڏورانهين عضون تائين پکڙجڻ گهٽجي ويندو آهي، ۽ UBR5 خاص طور تي E-ڪيڊرين اظهار کي گهٽائڻ سان غير معمولي EMT پيدا ڪري ٿو (Zhang ۽ Weinberg، 2018). تازو، UBR5 کي TNBC ۾ IFN-γ-induced PDL1 ٽرانسڪرپشن ۾ هڪ تمام اهم عنصر طور ڏيکاريو ويو آهي ڇاڪاڻ ته ان جي E3 ubiquitination سرگرمي جي کوٽ آهي. RNA ٽرانسڪرپٽوم تجزيو ظاهر ڪيو ته UBR5 شايد IFN-γ رستي سان لاڳاپيل جين تي سسٽماتي اثر رکي ٿو ۽ پروٽين ڪائنس RNA (PKR) ۽ ان جي سگنل ٽرانسڊيوسرز ۽ ايڪٽيويٽرز جي ايڪٽيويشن ليول کي وڌائي PDL1 ٽرانس ايڪٽيويشن کي فروغ ڏئي ٿو. ٽرانسڪرپشن 1 (STAT1) ۽ انٽرفيرون ريگيوليٽري فيڪٽر 1 (IRF1). جڏهن ته، UBR5 ۽ PD-L1 اظهار جي CRISPR/Cas9-ثالثي ٿيل گڏيل خاتمي جو صرف بلاڪڊ جي ڀيٽ ۾ هڪ هم آهنگي وارو علاج اثر آهي، جنهن جو ٽيومر مائڪرو ماحول تي گہرا اثر آهي (وو ۽ ٻيا، 2022). ان ڪري، CRISPR/Cas9 UBR5 فنڪشن کي روڪڻ لاءِ هڪ اهم اوزار ٿي سگهي ٿو، ان ڪري TNBC ميٽاسٽيسس ۽ ٽيومر جي واڌ کي دٻايو وڃي ٿو.
ROR1 هڪ قسم I ٽرانسميمبرين پروٽين آهي جيڪو ڪينسر ۽ جنين جي ترقي دوران ظاهر ٿئي ٿو ۽ ان جي سڃاڻپ هڪ آنڪوفيٽل پروٽين جي طور تي ڪئي وئي آهي (نڪولس بورچرڊنگ، 2014). مختلف انساني ڪينسرن جو ناگوار رويو ROR1 جي اپ ريگيوليشن سان لاڳاپيل آهي. ان ويوو ۽ ان ويٽرو مطالعي مان واعدو ڪندڙ نتيجا حاصل ڪيا ويا آهن جن ۾ ROR1 کي نشانو بڻائڻ وارا علاج وارا مرکبات شامل آهن (Chien et al., 2016). سيني جي ٽشو بايوپسي ۾ ROR1 mRNA جي بلند سطح کي جارحاڻي بيسل جهڙي سيني (BL) ٽامي ۽ جسم جي ٻين حصن ڏانهن انهن جي منتقلي سان پڻ لاڳاپيل ڪيو ويو آهي. ان کان علاوه، ROR1 جي اوور ايڪسپريشن کي TNBC جي ترقي لاءِ هڪ پيشنگوئي نشان جي طور تي سڃاڻپ ڪيو ويو آهي (Chien et al., 2016). جڏهن ته، TNBC جي واڌ ۽ ميٽاسٽيسس کي دٻائڻ لاءِ CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي ROR1 کي خاموش ڪرڻ هڪ مؤثر حڪمت عملي هوندي.
سياليليشن جي عمل ۾ گلائڪوڪونجگيٽس ۾ سيالڪ ايسڊ جو اضافو شامل آهي، جيڪو سياليل ٽرانسفيريز (STs) ذريعي ڪيٽيلائيز ڪيو ويندو آهي. ST8SIA1 ST خاندان سان تعلق رکي ٿو ۽ مختلف بيمارين جهڙوڪ لمفوسائيٽڪ ليوڪيميا ۽ ڪولوريڪٽل ڪينسر جي روگجنيسس ۾ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو (چانگ ۽ ٻيا، 2018). آر اين اي سيڪوئنس تجزيو ڏيکاري ٿو ته ST8SIA1 TNBC مريضن جي سيني جي ٽشو ۾ تمام گهڻو ظاهر ٿئي ٿو ۽ مثبت طور تي ٽيومر سپريسر جين p53 ۾ ميوٽيشنز سان لاڳاپيل آهي، جيڪو TNBC جي روگجنيسس ۾ حصو وٺي سگهي ٿو (Battula ۽ ٻيا، 2017). ان کان علاوه، ST8SIA1 TNBC جي ميٽاسٽيسس ۽ ٻيهر ٿيڻ ۾ شامل آهي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته اهو TNBC جي موجودگي ۽ ترقي ۾ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو. TNBC جي هڪ ان ويٽرو ماڊل ۾، CRIPSR/Cas9 پاران ST8SIA1 جي ناڪ ڊائون کي واڌ ۽ ميٽاسٽيسس کي روڪڻ لاءِ ڏيکاريو ويو (Battula ۽ ٻيا، 2017). ان مان ظاهر ٿئي ٿو ته CRISPR/Cas9 TNBC جي علاج ۾ ST8SIA1 آنڪوجين جي ڪم کي روڪڻ لاءِ هڪ اهم اوزار ٿي سگهي ٿو.
NAT1 هڪ ميٽابولڪ اينزائم آهي جيڪو مرحلي II زينوبيوٽڪ مرکبات جي ٺهڻ کي متحرڪ ڪري ٿو ۽ تقريبن سڀني انساني بافتن ۾ ظاهر ٿئي ٿو. NAT1 خوشبودار امين سبسٽريٽ جي غير موجودگي ۾ به ايسٽيل-CoA (ايسٽيل-CoA) کي نشانو بڻائڻ لاءِ ڪوفيڪٽر فوليٽ استعمال ڪري سگهي ٿو (اسٽيپ ۽ ٻيا، 2015؛ لاريري ۽ ٻيا، 2014). مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته NAT1 سيني جي ڪينسر سيل ماڊلز ۾ ميٽرڪس ميٽلوپروٽينيز 9 (MMP9) جي ڪم کي منظم ڪري ٿو ۽ گلوڪوز جي بک دوران رد عمل واري آڪسيجن اسپيشيز (ROS) کان بچائي ٿو (وانگ ۽ ٻيا، 2018). NAT1 کي ختم ڪرڻ پائروويٽ ڊيهائيڊروجنيز ڪمپليڪس کي روڪڻ لاءِ ڏيکاريو ويو آهي، جنهن جي ڪري مائيٽوڪونڊريل ڊسڪشن ٿئي ٿو (وانگ ايل ۽ ٻيا، 2019). اضافي طور تي، مختلف ٻين رپورٽن مان ظاهر ٿيو آهي ته ننڍڙن ماليڪيولز ۽ siRNA سائليننگ استعمال ڪندي NAT1 جي روڪٿام سيني جي ڪينسر سيلز جي حملي ۽ واڌ کي گهٽائي سگهي ٿي (اسٽيپ ۽ ٻيا، 2018). حال ۾، CRISPR/Cas9 کي بريسٽ ڪينسر سيل لائن MDA-MB-231 ۾ NAT1 کي دٻائڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو، جيڪو سيلولر ميٽابولزم کي متاثر ڪري ٿو ان جي اظهار جي سطح تي منحصر ڪري ٿو. هن مطالعي اهو پڻ ڏيکاريو ته NAT-1 TNBC جي ترقي ۽ ميٽاسٽيسس لاءِ اهم آهي (ڪارليسل ۽ ٻيا، 2020).
آنڪوجينز جي هم آهنگ ٽرانسڪرپشن کي سپر اينهانسرز، ٽرانسڪرپشن فيڪٽرز ۽ ڪوفيڪٽرز (Hnisz et al.، 2015) ذريعي منظم ڪيو ويندو آهي. ان کان علاوه، سائيڪلن تي منحصر ڪائنيز (CDKs) جو هڪ گروپ، جهڙوڪ CDK7، CDK8، CDK9، CDK12، ۽ CDK13، ٽرانسڪرپشنل ريگيوليشن لاءِ گهربل آهن. انهن مان، CDK7 آر اين اي پوليميرس II جي فاسفوريليشن ۾ شامل آهي، جيڪو TNBC جي پيٿوجينيسس ۾ آنڪوجين ٽرانسڪرپشن جي شروعات ۽ توسيع لاءِ تمام ضروري آهي. هڪ بنيادي مطالعي ۾، CRISPR/Cas9 پاران CDK7 جي حذف ٿيڻ TNBC کي روڪيو، اهو ظاهر ڪري ٿو ته TNBC جو پيٿوجينيسس CDK7 تي منحصر آهي (وانگ وائي ۽ ٻيا، 2015).
مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته MYC ۽ RBP (RNA بائنڊنگ پروٽين) ۾ ميوٽيشنز اپوپٽوسس جو سبب بڻجي سگهن ٿيون، جڏهن ته MYC يا RBP ۾ سنگل جين ميوٽيشنز ڪينسر جي سيلز جي واڌ کي متاثر نه ڪندا آهن (آئنسٽائن ۽ ٻيا، 2021). انساني جينوم ۾ 1000 کان وڌيڪ RBPs کي CRISPR/Cas9 تي ٻڌل لائبريري استعمال ڪندي اسڪرين ڪيو ويو آهي. انهن مان، 57 RBPs کي انتهائي بلند MYC سطحن سان ڪينسر جي سيلز جي واڌ لاءِ اهم مليو (وهيلر ۽ ٻيا، 2020). ان کان علاوه، YTHDF2 TNBC سيل جي واڌ کي برقرار رکڻ لاءِ اهم آهي ۽ اعلي MYC اظهار سان ڪينسر جي سيلز ۾ اعلي سطحي ٽرانسڪرپشن ۽ ترجمي دوران ميٿائليٽڊ ٽرانسڪرپٽس جي مقدار کي گھٽائي ٿو. اضافي طور تي، YTHDF2 ڪينسر جي سيلز لاءِ ضروري ناهي، جيڪي TNBC مريضن جي بقا کي طول ڏيڻ لاءِ بلند MYC سطحن تي گهٽ انحصار ڪن ٿا (آئنسٽائن ۽ ٻيا، 2021)، اهو مشورو ڏئي ٿو ته اهو دوائن لاءِ هڪ امڪاني علاج جو هدف ٿي سگهي ٿو جيڪي TNBC تي قابو پائي سگهن ٿيون.
زنڪ فنگر پروٽين (ZNFs) ڪل انساني جينوم جو تقريباً 1٪ ٺاهيندا آهن. مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته ZNF مختلف ڪينسرن ۾ سيل جي واڌ کي منظم ڪري سگهي ٿو، جهڙوڪ جگر جو ڪينسر، سيني جو ڪينسر ۽ ڪولوريڪٽل ڪينسر (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017). CRISPR ناڪ آئوٽ پاران پيدا ڪيل لائبريريون سيني جي ڪينسر جي سيلن ۾ مختلف ٽيومر سپريسر جين (TSGs) کي اسڪرين ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيون ويون آهن (Shalem et al., 2014). ان کان پوءِ، CRISPR/Cas9 ZNF319-ڊليٽ ٿيل سيني جي ڪينسر جي سيلن جي هڪ ٽرانسڪرپٽوميڪ مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته ZNF319 هڪ ٽيومر سپريسر جين آهي جيڪو سيني جي ڪينسر جي واڌ کي گهٽائي ٿو ۽ تنهن ڪري مختلف امڪاني سگنلنگ ميڪانيزم ۽ ٻين حياتياتي ڪمن ۾ شامل آهي (Wang L. et al., 2022).
فيروپٽوسس هڪ قسم جو پروگرام ٿيل سيل ڊيٿ آهي جيڪو لوهه جي موجودگي تي منحصر آهي. اهو معلوم آهي ته فيروپٽوسس جي ترقي لپڊ پيرو آڪسائيڊ جي موجودگي کان متاثر ٿئي ٿي. ان کان علاوه، PKCβII کي شروعاتي لپڊ پيرو آڪسائيڊشن جي نمائش ڪرڻ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي، ۽ وڌندڙ لپڊ پيرو آڪسائيڊشن فيروپٽوسس سان لاڳاپيل آهي. CRISPR/Cas9-mediated kinase inhibitors جي لائبريري جي اسڪريننگ مان ظاهر ٿيو ته PKCβII لپڊ پيرو آڪسائيڊشن جي عمل ۾ شامل آهي، جيڪو MDA-MB-231 سيلز ۾ فيروپٽوسس لاءِ اهم آهي (Zhang et al., 2022). تنهن ڪري، اهو مشورو ڏئي ٿو ته CRISPR/Cas9 پاران PKCβII جو نڪ آئوٽ فيروپٽوسس سان لاڳاپيل بيمارين جي علاج لاءِ هڪ امڪاني ٽيومر کي دٻائيندڙ جين جو هدف ٿي سگهي ٿو (Zhang et al., 2022).
ڪينسر جي مريضن ۾ تقريبن 90 سيڪڙو موتن لاءِ دوا جي مزاحمت کي ذميوار سمجهيو ويندو آهي ۽ اهو ڪينسر جي علاج ۾ هڪ وڏو چئلينج آهي (بڪووسڪي ۽ ٻيا، 2020). نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته دوا جي وهڪري، ڊي اين اي جي مرمت، اپوپٽوسس ۽ مختلف سيل سگنلنگ رستن سان لاڳاپيل جين جو ڪافي تعداد دوا جي مزاحمت سان لاڳاپيل آهي (حيدر ۽ ٻيا، 2020). انهن مان، ڪيترن ئي جين کي CRISPR/Cas9 اوزارن پاران نشانو بڻايو ويو آهي ۽ دوا جي مزاحمت کي گهٽائڻ ۽ ڪينسر مخالف علاج جي اثرائتي کي وڌائڻ ۾ واعدو ڪندڙ نتيجا ڏيکاريا آهن (وغاري-تاباري ۽ ٻيا، 2022). ان کان علاوه، اعليٰ-ٿرو پُٽ CRISPR/Cas9 جين ناڪ آئوٽ اسڪريننگ لائبريريون امڪاني دوا جي مزاحمت جين جي هدفن جي ڪم کي تبديل ڪرڻ ۾ ملوث آهن (شالم ۽ ٻيا، 2015). پيڪليٽيڪسيل مزاحمتي جين کي سڃاڻڻ لاءِ، جينوم-وائڊ sgRNA لائبريري اسڪريننگ سان گڏ آر اين اي سيڪوئنسنگ اٺ اميدوار جين جي سڃاڻپ لاءِ استعمال ڪئي وئي، جن ۾ هسٽون ڊيسيٽيليز 9 (HDAC9) شامل آهن، جيڪي بار بار TNBC (B et al.، 2020) سان مريضن ۾ دوا جي مزاحمت سان لاڳاپيل آهن. هڪ ٻئي مطالعي ۾، ڪينسر مخالف دوائن سان علاج ڪيل TNBC مريضن جي بقا دوران ڊزيرين/ٿرونائن ۽ ٽائروسائن پروٽين ڪائنيس (DSTYK) جي وڌندڙ اظهار کي ڏٺو ويو. ان کان علاوه، DSTYK جي CRISPR/Cas9-ثالثي ٿيل دستڪ ان ويٽرو ۾ دوا جي مزاحمتي ڪينسر سيلز (SUM102PT سيلز ۽ MDA-MB-468 سيلز) ۽ هڪ ان ويوو TNBC ماڊل (Ogbu et al.، 2021) جي اپوپٽوسس کي خاص طور تي وڌايو.
جيتوڻيڪ TNBC ۾ MAPK رستي جي غير معمولي چالو ٿيڻ آهي، MEK-هدف ٿيل علاج جو ڪلينڪل اثر خراب آهي. هڪ CRISPR/Cas9 جينومڪ لائبريري اسڪرين ظاهر ڪيو ته PSMG2 (پروٽيوم اسيمبلي چيپرون 2) جي روڪٿام TNBC BT549 ۽ MB468 سيلز کي MEK انبيٽر AZD6244 ڏانهن حساس بڻائي ٿي. PSMG2 جي CRISPR/Cas9 جي ناڪ ڊائون عام پروٽيزوم فنڪشن کي تبديل ڪري ڇڏيو، جنهن جي نتيجي ۾ PDPK1 جي آٽوفيگي-ميڊئيٽيڊ ڊسڪشن ٿي، ان ڪري AZD6244 (MEK انبيٽر) ۽ MG132 (پروٽيزوم انبيٽر) پاران متاثر ٿيل TNBC ماؤس ماڊلز ۾ ٽيومر سيلز کي وڌيڪ بهتر بڻايو ويو. ان ڪري، پروٽيزوم ۽ MAP ڪائنس (MEK) انبيٽرز کي ٽيومر سيل جي واڌ کي گهٽائڻ لاءِ هم آهنگي سان منظم ڪري سگهجي ٿو (وانگ ايڪس. وغيره، 2022).
CRISPR/Cas9 کي TNBC مزاحمت جي طرف وٺي ويندڙ جين جي ڪم جي نقصان جي اسڪريننگ لاءِ پڻ استعمال ڪيو ويو آهي (Shu et al., 2020). Ge et al TNBC ۾ JQ1، هڪ BET bromodomain inhibitor (BBDI) سان علاج ڪيل ڪينسر جي سيلز جي دوا جي مزاحمت جي ميڪانيزم جي وضاحت ڪئي. CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي، انهن ڏٺو ته rb1 جين کي ختم ڪرڻ سان TNBC ڪينسر مخالف دوا JQ1 جي مزاحمتي بڻجي ويو. تنهن ڪري، TNBC ۾ JQ1 دوائن جي جواب ۾ rb1 فنڪشن اهم آهي. انهن اهو پڻ ٻڌايو ته paclitaxel هڪ CDK4/6 kinase/microtubule inhibitor آهي، ۽ BBDIs جهڙوڪ JQ1 سان ان جو ميلاپ دوا جي مزاحمتي TNBC لاءِ واعدو ڪندڙ علاج جا جواب فراهم ڪري سگهي ٿو (Ge et al., 2020).
ڊگهي نان ڪوڊنگ آر اين اي (lncRNA) جي ٽرانسڪرپشنل لينڊ اسڪيپ کي TNBC ۾ نيواڊجوانٽ ٿراپي جي مزاحمت لاءِ ذميوار قرار ڏنو ويو آهي. هي مطالعو ڏيکاري ٿو ته پنج مختلف MALAT1 lncRNA ٽرانسڪرپٽ TNBC ۾ تمام گهڻو ظاهر ڪيا ويا آهن. اضافي طور تي، MALAT1 جي CRISPR/Cas9-ثالثي حذف ڪرڻ TNBC BT-549 سيلز جي حساسيت کي پيڪليٽيڪسيل ۽ ڊڪسوروبيسن ڏانهن وڌايو، TNBC ۾ MALAT1 مزاحمت لاءِ هڪ امڪاني ڪردار جو مشورو ڏئي ٿو (Shaath et al., 2021).
BRCA1 (BRCA1m) ۾ ميوٽيشنز متضاد آهن ۽ ان ڪري ڳولڻ ڏکيو آهي. PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase) کي نشانو بڻائڻ، جيڪو BRCA1 جو مصنوعي موتمار ساٿي آهي، TNBC دوا جي ڪيمو حساسيت کي وڌائي سگھي ٿو. CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي، PARP1 کي ختم ڪرڻ سان ڪينسر مخالف دوائن جهڙوڪ ڊاڪسوروبسن، گيمڪٽيبائن ۽ ڊوسيٽيڪسل جي mBRCA1 ميوٽنٽ TNBC سيلز جي حساسيت وڌي وئي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته PARP1 TNBC ۾ دوا جي مزاحمت ۾ پڻ شامل آهي (Vaghari-Tabari et al., 2022). . ٽيومر کي دٻائيندڙ جين BRCA1 يا BRCA2 ۾ ميوٽيشنز ماڻهن ۾ سيني جي ڪينسر جي ترقي جي امڪان کي وڌائڻ لاءِ سڃاتل آهن. انهن مريضن جي علاج لاءِ PARP inhibitors جي استعمال جي ضرورت آهي. ان کان علاوه، اهو ظاهر ڪيو ويو آهي ته CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي نيوڪليوٽائيڊ بچاءُ عنصر DNPH1 جي ناڪ آئوٽ زهريلي نيوڪليوٽائيڊ 5-هائيڊروڪسي ميٿيلڊي آڪسيوريڊين (hmdU) مونوفاسفيٽ کي ختم ڪري سگهي ٿي، ان ڪري BRCA-گهٽت واري سيلز جي PARP انابيٽرز (Fugger) جي حساسيت جي جواب کي وڌائي ٿي. وغيره، 2021). اهڙيءَ طرح، CRISPR/Cas9 ۽ PARP1 انابيٽرز TNBC لاءِ هڪ اهم علاج جي حڪمت عملي بڻجي سگهن ٿا.
پينيٽرنٽ گلائڪوپروٽين (P-gp) جين هڪ ملٽي ڊرگ مزاحمتي جين آهي جيڪو عام طور تي سڀني TNBC جي تقريبن 41٪ ۾ اپريگيولڊ هوندو آهي (سن ۽ ٻيا، 2020). P-gp-حوصلہ افزائي دوا جي وهڪري کي سيني جي ڪينسر ۾ دوا جي مزاحمت جي هڪ اهم ريگيوليٽر طور سڃاتو ويو آهي. P-gp انبيٽرز سيني جي ڪينسر ۾ اينٽي ڪينسر دوائن جي حساسيت ۾ اضافو ڏيکاريو آهي (Famta ۽ ٻيا، 2021). اهڙيءَ طرح، CRISPR/Cas9-ثالثي سان P-gp ۽ P-gp انبيٽرز جو خاتمو يا دٻاءُ TNBC ۾ دوا جي مزاحمت تي قابو پائڻ لاءِ تمام اهم طريقا ٿي سگهن ٿا.
ATP-بائنڊنگ ڪيسٽ ٽرانسپورٽر G2 (ABCG2) TNBC ۾ دوا جي مزاحمت جو سبب بڻجڻ لاءِ سڃاتو وڃي ٿو (Palasuberniam et al., 2015)، جيتوڻيڪ هن وقت CRISPR/Cas9 ۽ ABCG2 جي خاموشي ۽ ٽيومر کي دٻائيندڙ جين جي غير فعال ٿيڻ جي وچ ۾ تعلق بابت ڪا به رپورٽ ناهي. PTEN ABCG2 جي چالو ٿيڻ کي وڌائي سگھي ٿو (Palasuberniam et al., 2015)، (ديپڪ سنگھ et al., 2021). تنهن ڪري، ABCG2 کي هٽائڻ لاءِ CRISP/Ca9 استعمال ڪرڻ ۽ ان کي ABCG2 انبيٽر سان گڏ ڪرڻ TNBC ۾ دوا جي مزاحمت کي ختم ڪرڻ لاءِ هڪ مناسب علاج ٿي سگهي ٿو. ٽيبل 2 CRISPR/Cas9 جو ذڪر ڪري ٿو جيڪو سڀني مزاحمتي جين کي نشانو بڻائي ٿو.
ٽيبل 2. CRISPR/Cas9 مختلف TNBC مزاحمتي جينز کي نشانو بڻائي ٿو ته جيئن سيلز کي ڪينسر مخالف دوائن لاءِ حساس بڻائي سگهجي.
CRISPR/Cas9 لائبريريون ڪينسر جي بيماري سان لاڳاپيل جين ميوٽيشنز جي اسڪريننگ لاءِ امڪاني اوزار آهن (چان ۽ ٻيا، 2022). هن اسڪريننگ جي طريقي ۾ چار مرحلا شامل آهن جهڙوڪ (a) لائبريري جي تعمير، (b) لينٽي وائرل ٽرانسڊڪشن، (c) فينوٽائپڪ اسڪريننگ، ۽ (d) ٽارگيٽ جين تجزيو. جيتوڻيڪ TNBC ۾ MAPK رستي جي غير معمولي چالو ٿيڻ آهي، TNBC مريضن لاءِ MEK ٽارگيٽ ٿيل علاج جو ڪلينڪل پروگنوسس جيڪي ٽيومر سپريسر جين جهڙوڪ PTEN، RB1، ۽ TP53 ۾ ميوٽيشنز کڻندا آهن، تمام خراب آهي.
اضافي طور تي، CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي هڪ جين ناڪ آئوٽ اسڪرين سڀ کان وڌيڪ طاقتور ۽ چونڊيل ماليڪيول، ڊيهائيڊروڪيٽرول، جيڪو گوئٽي مالا جي گلن ۽ پنن جي عرق ۾ گهڻو آهي، کي جانچيو ته جيئن MDA-MB-231 تي ڊيهائيڊروڪيٽرول جي اثر کي سمجهي سگهجي. چونڊيل سيل سائيٽوٽوڪسيسيٽي جا طريقا. TNBC ذيلي قسمن جي ميسينچيمل اسٽيمنس خاصيتون. هن CRISPR/Cas9 تي ٻڌل اسڪرين اهو پڻ ظاهر ڪيو ته HSD17B11، هڪ جين جيڪو 17β-هائيڊروڪسيسٽرائيڊ ڊيهائيڊروجنيز قسم 11 کي انڪوڊ ڪري ٿو، MDA-MB-231 سيلز ۾ تمام گهڻو ظاهر ٿئي ٿو ۽ نتيجي ۾ MDA-MB-231 سيلز لاءِ مخصوص ڊيهائيڊروفالڪارينول پيدا ٿئي ٿو (گرانٽ وغيره، 2020). ان ڪري، اهو مشورو ڏئي ٿو ته CRISPR/Cas9 جينومڪ اسڪريننگ ۾ امڪاني قدرتي مرڪبن جي ڪينسر مخالف خاصيتن جي بنياد تي ميڪانيزم جي سڃاڻپ ۾ وڏي صلاحيت آهي.
ان کان علاوه، ڪينسر جي خلاف TNBC جي ڪمزوري جو مطالعو هڪ غير جانبدار جينوم-وائڊ ان ويوو CRISPR/Cas9 اسڪرين استعمال ڪندي ڪيو ويو، جنهن آنڪوجينڪ ۽ ٽيومر کي دٻائيندڙ رستن جي وچ ۾ هڪ تعلق ڏيکاريو. mTOR ۽ هپو رستن جي اهم حصن کي TNBC ۾ ٽيومر جي ضابطي ۾ اهم ڪردار ادا ڪرڻ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي. اضافي طور تي، مطالعي ڏيکاريو آهي ته mTORC1/2 ۽ YAP آنڪوپروٽين جي فارماسولوجيڪل انبيڪشن مؤثر طريقي سان ان ويٽرو ڊرگ-ميٽرڪس سنرجي ماڊل ۽ ان ويوو مريض مان نڪتل زينوگرافٽس استعمال ڪندي TNBC جي روگجنڪ کي روڪي ٿي. ان کان علاوه، ٽورين-1-ميڊئيٽيڊ mTORC1/2 انبيڪشن ميڪروپينو سائٽوسس کي وڌائي ٿو، جڏهن ته ورٽيپورفن-حوصلہ افزائي YAP انبيڪشن TNBC سيل جي موت جو سبب بڻجي ٿو. گڏ ڪيو ويو، اهي نتيجا TNBC لاءِ ناول ۽ اثرائتي علاج جي سڃاڻپ لاءِ جينوم-وائڊ ان ويوو CRISPR اسڪريننگ جي طاقت ۽ مضبوطي کي اجاگر ڪن ٿا (ڊائي ۽ ٻيا، 2021).
مدافعتي نظام جي خرابي ٽيومر جي پيدائش ۾ هڪ اهم عنصر آهي. ڪينسر جا سيل دفاعي ميڪانيزم کي نظرانداز ڪندي مدافعتي صفائي کان بچي ويندا آهن، جنهن ۾ ٽيومر مائڪرو ماحول ۾ مدافعتي سيلز جي سرگرمي ۾ مداخلت ۽ مدافعتي نظام کي نقصان پهچائڻ شامل آهي. تنهن ڪري، هڪ بهتر مدافعتي نظام کي ترقي ڪرڻ ٽيومر سان وڙهڻ لاءِ هڪ اهم طريقو ٿي سگهي ٿو. CRISPR/Cas9 تي ٻڌل جين ترميم جو استعمال مختلف نقطه نظر کان مدافعتي خرابي سان لاڳاپيل ڪيترن ئي مسئلن کي حل ڪري ٿو. CRISPR/Cas9 کي هيٺين طريقن سان سيني جي ڪينسر جي خلاف اينٽي ٽيومر مدافعت کي بهتر بڻائڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو آهي (شڪل 3).
شڪل 3. CRISPR/Cas9 اميونوٿراپي TNBC سيلز کي نشانو بڻائي ٿي. CDK5 جي نقصان ۽ PDL1 ۽ CD155 جي ناڪ ڊائون مدافعتي نظام کي وڌائي ٿي. ساڳئي طرح، A2AR جي نقصان ۽ TAAs جهڙوڪ HER2، mucin 1 ۽ TEM8 جي ناڪ ڊائون ڪينسر سيلز کي مارڻ ۾ CAR-T سيلز جي ڪارڪردگي کي وڌايو. CRISPR/Cas9-driven T سيل اسڪريننگ ڏيکاريو آهي ته p38 kinase جي خلل ٽي سيل اينٽي ٽيومر سرگرمي کي وڌائي ٿي. CRISPR/Cas9 پاران تبديل ٿيل ٽي سيلز TCR (T سيل ريسيپٽر) جي اظهار کي وڌائين ٿا، جنهن جي نتيجي ۾ ٽي سيلز اينٽي ٽيومر سرگرمي رکن ٿا.
اميونٿراپي جو مقصد مدافعتي نظام کي ڪينسر جي سيلن تي حملو ڪرڻ لاءِ متحرڪ ڪرڻ آهي. مدافعتي چيڪ پوائنٽ پروٽين جو اوور ايڪسپريشن عام طور تي آٽو ايميون رد عمل کي روڪيندو آهي پر ڪينسر کي انهن کان بچڻ ۾ مدد ڪري سگهي ٿو (ٽوپالين ۽ ٻيا، 2015). اهي پروٽين مدافعتي سيلن جي مٿاڇري تي ريڪٽرز سان ڳنڍيل هجڻ سان مدافعتي رد عمل کي روڪيندا آهن. ڪيترائي چيڪ پوائنٽ پروٽين (جهڙوڪ CD155 ۽ PD-L1) مدافعتي سيلن تي PD-1 ريڪٽر کي نشانو بڻائيندا آهن ۽ سيني جي ڪينسر ۾ ظاهر ٿيندا آهن، خاص طور تي TNBC (Li Y.-C. وغيره، 2020). CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي PD-L1 يا ان جي ريڪٽر جو ناڪ ڊائون مدافعتي نظام کي TNBC ٽيومر تي حملو ڪرڻ لاءِ متحرڪ ڪري سگهي ٿو (Yahata ۽ ٻيا، 2019). اضافي طور تي، CDK5 جي CRISPR/Cas9-ثالثي حذف ڪرڻ ذريعي PD-L1 اظهار جي گهٽتائي کي ويٽرو ۽ ان ويوو ۾ ٽيومر جي واڌ کي روڪڻ لاءِ ڏيکاريو ويو آهي (ڊينگ ۽ ٻيا، 2020). سيني جي ڪينسر جي ان ويٽرو ۽ ان ويوو ماڊلز ۾ واڌ جي روڪٿام مان ظاهر ٿئي ٿو ته CD155 جي shRNA-ثالثي گهٽتائي سيني جي ڪينسر تي علاج جو اثر رکي سگهي ٿي (گاو ۽ ٻيا، 2018).
CAR T سيلز CARs ظاهر ڪن ٿا جيڪي ٽيومر سان لاڳاپيل اينٽيجنز (TAAs) کي سڃاڻن ٿا ۽ انهن جي سرگرمي کي وڌائڻ لاءِ چيڪ پوائنٽ پروٽين جي ناڪ ڊائون استعمال ڪري سگهن ٿا (Li C. et al., 2020). سيني جي ڪينسر ۾ CAR T سيل ٿراپي لاءِ مختلف امڪاني هدف آهن، جن ۾ HER2، mucin1، ۽ TEM8 جهڙا ڪيترائي TAA شامل آهن (Bajgain et al., 2018). اهڙا ثبوت آهن ته CAR T سيلز جيڪي ميسوٿيلين کي نشانو بڻائين ٿا (TNBC BT-459 سيلز ۾ اوور ايڪسپريس ٿيل) ڪينسر جي خلاف وڌيڪ اثرائتو آهن جڏهن PD-1 کي CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019) استعمال ڪندي ختم ڪيو ويندو آهي. تاهم، مريضن کان ٽي سيلز کي الڳ ڪرڻ ۽ پوءِ انهن کي ايڪس ويو ايڊٽ ڪرڻ هڪ محنت طلب ۽ وقت وٺندڙ عمل آهي. جيتوڻيڪ عالمگير ٽي سيلز آئسوليشن جي گهرجن کي گهٽائي سگهن ٿا، ڊونر ٽي سيلز کي انساني ليوڪوائيٽ اينٽيجن (HLA) ڪلاس I ۽ ٽي سيل ريڪٽر (TCR) کي ظاهر ڪرڻ کي هٽائڻ گهرجي ته جيئن گرافٽ-بمقابله-ميزبان غير معموليات کي روڪي سگهجي (Ren et al., 2017). ، 2017a). CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي، HDR هڪ ئي وقت TCR ۽ HLA کي ختم ڪري سگهي ٿو ۽ CAR کي انڪوڊ ڪندڙ جين کي ختم ڪري سگهي ٿو. مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته CRISPR/Cas9 کي TCR لوڪوس ۾ اينٽي CD19 CARs متعارف ڪرائڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو، انهي ڪري T سيلز کي ختم ڪرڻ کان سواءِ ڪارآمد طريقي سان CARs پيدا ڪري سگهجي ٿو (Dimitri et al., 2022). ملٽي پلڪس ٽيڪنالاجيون تيار ڪيون ويون آهن ته جيئن TCR، بيٽا-2-مائڪروگلوبلين (B2M)، HLA-I سب يونٽ ۽ ٻين پروٽين جهڙوڪ PD-1 ۽ CTLA-4 کي ختم ڪري الوجينڪ CAR T سيلز پيدا ڪري سگهجن، جن ۾ TNBC جي خلاف وڌيڪ اينٽي ڪينسر خاصيتون هجن (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022).
CRISPR/Cas9 استعمال ڪرڻ سان CAR-T سيلز جي اثرائتي بهتر ٿي سگهي ٿي. ايڊينوسين کي اميونوسپريسيو خاصيتون هجڻ جي ڪري سڃاتو وڃي ٿو ۽ ٽي سيل جي ڪم کي بلاڪ ڪندي ۽ ايڊينوسين A2A ريڪٽرز (A2AR) کي چالو ڪندي ڪينسر مخالف قوت مدافعت کي گهٽائي سگهي ٿو (ويگانو ۽ ٻيا، 2019). CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي A2AR کي خاموش ڪرڻ سان وييو ۾ CAR-T سيلز جي اثرائتي ۾ نمايان بهتري آئي (Giuffrida ۽ ٻيا، 2021). ٽي سيلز مختلف فينوٽائپڪ خاصيتن جهڙوڪ سيلولر توسيع، تفريق، آڪسائيڊيوٽيو دٻاءُ ۽ جينومڪ دٻاءُ کي ظاهر ڪرڻ لاءِ سڃاتا وڃن ٿا. CRISPR/Cas9 تي ٻڌل ٽي سيل اسڪريننگ ۾ 25 مختلف ٽي سيل ريڪٽر ڪائنيز جي خلل جو انڪشاف ظاهر ٿيو. انهن مان، p38 ڪائنيز کي ختم ڪرڻ سان ٽي سيلز جي اينٽيٽيمر سرگرمي کي وڌائڻ لاءِ ڏيکاريو ويو آهي، اهو ظاهر ڪري ٿو ته p38 ڪائنيز CAR-T سيل ريگيوليشن جو هڪ اهم ريگيوليٽر آهي (گروسامي ۽ ٻيا، 2020).
ٽي سيلز کي جينياتي طور تي CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي تبديل ڪري سگهجي ٿو ته جيئن انتهائي ظاهر ٿيل TCRs پيدا ڪري سگهجن. مريضن کي جينياتي طور تي تبديل ٿيل T سيلز منتقل ڪرڻ سان اينٽي ڪينسر سرگرمي وڌيڪ مضبوط ٿي چڪي آهي. تنهن ڪري، اينٽي جنيئس TCRs مريضن ۾ جينياتي طور تي تبديل ٿيل TCRs سان مقابلو ڪري سگهن ٿا، جيڪو ڪينسر جي اميونٿراپي جي صلاحيت کي متاثر ڪري سگهي ٿو. هن مسئلي تي قابو پائڻ لاءِ، وصول ڪندڙ سيلز ۾ اينٽي جنيئس TCR-β کي هٽائڻ لاءِ CRISPR/Cas9 استعمال ڪرڻ ۽ بعد ۾ ڪينسر جي مريضن کي TCR-β T سيلز منتقل ڪرڻ سان اينٽي جنيئس TCR جنسي مقابلي جي ضرورت کان سواءِ بهتر اينٽي ڪينسر مدافعتي ردعمل ظاهر ٿي سگهن ٿا (فين ۽ ٻيا. 2018). اهڙيءَ طرح، CRISPR-تبديل ٿيل T سيلز جي استثنا سان، TCRs عام TCR-ٽرانسڊيوسڊ T سيلز جي ڀيٽ ۾ ٽيومر اينٽيجنز لاءِ هزار ڀيرا وڌيڪ حساس هوندا آهن. اضافي طور تي، مختلف ليوڪيميا ۾، γδ TCR+ CRISPR پاران پيدا ٿيندڙ تبديل ٿيل T سيلز معياري TCR منتقلي جي ڀيٽ ۾ CD4+ ۽ CD8+ T سيلز جي وڌيڪ اظهار کي ظاهر ڪن ٿا (ليگٽ ۽ ٻيا.، 2018). تنهن ڪري، CRISPR/Cas9 پاران پيدا ٿيندڙ تبديل ٿيل ٽي سيلز TNBC تي قابو پائڻ لاءِ هڪ مؤثر اميونوٿراپي طريقو ٿي سگهن ٿا.
انٽيگرين سيل ايڊهيشن ماليڪيول آهن جيڪي سيلولر ٽرانسميمبرين ۾ موجود آهن ۽ سيلز کي ايڪسٽرا سيلولر ميٽرڪس (ECM) سان ڳنڍڻ کي فروغ ڏين ٿا (حميدي ۽ آئيواسڪا، 2018). انٽيگرين جي خرابي ڪينسر جي ترقي ۽ منتقلي سان لاڳاپيل آهي ايڪسٽرا سيلولر ميٽرڪس کي تبديل ڪندي، گردش ۾ ڪينسر سيل جي بقا جو سبب بڻجندي آهي (حميدي ۽ آئيواسڪا، 2018). CRISPR/Cas9-mediated integrin knockdown TNBC ۾ ٽيومر جي ترقي، ميٽاسٽيسس، ۽ ڪالونائيزيشن کي سست ڪري ٿو. انٽيگرين a5 (ITGA5) جي ناڪ ڊائون کي ٻين ڪينسر جهڙوڪ ڦڦڙن جي ڪينسر ۾ سيل جي منتقلي ۽ ترقي کي گهٽائڻ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي (Ju et al.، 2017)، اهو مشورو ڏئي ٿو ته انٽيگرين a5 TNBC جي پيٿوجينيسس ۾ هڪ اهم عنصر پڻ ٿي سگهي ٿو.
روايتي ايمبريونڪ اسٽيم (ES) سيل طريقن کي استعمال ڪندي نڪ آئوٽ چوٿون پيدا ڪرڻ هڪ محنت طلب، وقت وٺندڙ، ۽ غير موثر عمل آهي. هوموگس ري ڪمبينيشن ذريعي ES سيلز کي نشانو بڻائڻ، چيميرڪ چوٿين کي نسل ڏيڻ، ۽ پوءِ انهن کي هيٽروزائگس چوٿين سان پار ڪرڻ لاءِ هوموگس اولاد پيدا ڪرڻ لاءِ مهينا ۽ سال لڳن ٿا. ڪيترن ئي جينياتي ميوٽيشنز سان چوٿون پيدا ڪرڻ لاءِ پيچيده ڪراس بريڊنگ جي ضرورت آهي. بهرحال، CRISPR/Cas9 استعمال ڪندي ES سيلز جي خاتمي ذريعي پيدا ٿيندڙ چوٿون يا سنگل سيل فرٽيلائزڊ انڊن ۾ CRISPR/Cas9 حصن کي مائڪرو انجيڪٽ ڪندي استعمال ڪرڻ وقت ڪيترائي مسئلا پيدا ٿيا آهن. مثال طور، تبديلين جو تعارف اڪثر ڪري بائيليلڪ لوڪي تي ٿيندو آهي ۽ جين مخصوص نه هوندو آهي. تازو ئي رپورٽ ڪيو ويو آهي ته CRISPR/Cas9 ٽيڪنالاجي استعمال ڪندي ES سيلز هڪ ئي وقت 5 جينز ۾ بائيليلڪ ميوٽيشنز داخل ڪري سگهن ٿا (نيشيزو ۽ ٻيا، 2021). هن مقصد لاءِ، Cas9 mRNA ۽ پنج جين مخصوص gRNAs هڪ ئي وقت ES سيلز ۾ منتقل ڪيا ويا. هي هن طريقيڪار جي واعدي ۽ اثرائتي کي اجاگر ڪري ٿو، جيتوڻيڪ اهي ميوٽيشنز شايد تڏهن منتقل ڪيا ويا هئا جڏهن ڪوئنٽوپل ناڪ آئوٽ چوٿون پيدا ڪرڻ لاءِ باني لائينون پيدا ڪيون ويون هيون. مطالعي ۾ هڪ حيرت انگيز دريافت جي رپورٽ پڻ ڪئي وئي آهي: ES سيلز کي هاڻي جينياتي طور تي تبديل ٿيل چوٿون ٺاهڻ جي ضرورت ناهي. ان جي بدران، مخصوص جين پراڊڪٽس کي هٽائڻ لاءِ، Cas9 mRNA ۽ gRNA کي سنگل سيل اسٽيج جنين ۾ داخل ڪيو ويو. نتيجي طور، ناڪ آئوٽ فائونڊر لائينون ٺاهيون ويون آهن جيڪي نظرياتي طور تي چوٿين ۾ جين ڊيليٽيشن جي نتيجن جو مطالعو ڪرڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجن ٿيون (Qin et al., 2016). اهڙيءَ طرح، CRISPR/Cas9 روايتي جينياتي انجنيئرنگ جي ڀيٽ ۾ گهٽ قيمت تي TNBC جي علاج لاءِ ٽرانسجينڪ چوٿين جي تخليق جي اجازت ڏئي ٿو. CRISPR/Cas سسٽم استعمال ڪندي، هڪ نئون ناڪ آئوٽ ماؤس ماڊل تيار ڪيو ويو آهي جيڪو TNBC ۾ هڪ يا وڌيڪ اينڊوجينس جين ۾ پوائنٽ ميوٽيشنز کي ڪاميابي سان متعارف ڪرائي سگهي ٿو. هن تصور جي بنياد تي، TNBC جا جانورن جا ماڊل BRCA1 ۽ p53 جي CRISPR/Cas9-ثالثي ڊيليٽيشن استعمال ڪندي پڻ تيار ڪري سگهجن ٿا، جنهن جي نتيجي ۾ HR مرمت، جينومڪ عدم استحڪام، ۽ ميوٽنٽ فينوٽائپس جو نقصان ٿيندو آهي (Annunziato et al., 2020).
في الحال، TNBC جي تشخيص لاءِ مختلف طريقا جهڙوڪ ميموگرافي، مقناطيسي گونج اميجنگ (MRI) ۽ الٽراسائونڊ استعمال ڪيا ويندا آهن. بهرحال، انهن طريقن جون ڪجهه حدون آهن. ميموگرافي کي مقامي سيني جي ٽشو جي تشخيص لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي نه ته ميٽاسٽيسس، جتي ڪينسر جا سيل ٻين عضون ڏانهن منتقل ٿي ويا آهن. الٽراسونوگرافي TNBC جي تشخيص لاءِ هڪ قابل اعتماد طريقو ناهي (چن ۽ لي-فيلڪر، 2023). MRI ۾ الٽراسائونڊ ۽ ميموگرافي جي ڀيٽ ۾ وڌيڪ حساسيت آهي، پر ان جي تشخيصي درستگي محدود آهي (شا ۽ چن، 2022). ٽشو بايوپسي ڪينسر جي سيلز کي سڃاڻڻ جو هڪ ناگوار طريقو آهي. بهرحال، ڪجهه حالتن ۾، هڪ بايوپسي ڪينسر جي ٽشو کي وڃائي سگهي ٿي جيڪڏهن سوئي دلچسپي جي علائقي کان پري ٿي وڃي. ان کان علاوه، اهو تمام مهانگو آهي ۽ مريض لاءِ صدمو ڏيندڙ ٿي سگهي ٿو. TNBC ڪينسر جي هڪ متفاوت قسم آهي، تنهن ڪري بايوپسي ڪينسر جي قسم بابت ڪافي معلومات فراهم نه ڪري سگهي ٿي. تنهن ڪري، TNBC کي ڳولڻ لاءِ هڪ نئون تشخيصي طور تي قابل اعتماد طريقو فوري طور تي گهربل آهي. CRISPR/Cas9 سيني جي ڪينسر جي تشخيص لاءِ هڪ انتهائي حساس ۽ گهٽ ۾ گهٽ ناگوار متبادل طور ڪم ڪري سگهي ٿو. انهي مقصد لاءِ، TNBC جي تشخيص لاءِ PCR طريقن کي بهتر بڻائڻ لاءِ CRISPR/Cas9 تي ٻڌل حڪمت عمليون استعمال ڪري سگهجن ٿيون. پهرين، CRISPR سسٽم جا Cas9 ۽ cpf1 پروٽين غير مخصوص DNA کي هٽائڻ لاءِ استعمال ڪيا ويندا آهن، ۽ پوءِ اهي ٻئي پروٽين (Cas9 ۽ cpf1) ٽارگيٽ DNA سان ڳنڍيل ٿيڻ کان اڳ PAM تسلسل کي سڃاڻي سگهن ٿا (ديپڪ سنگھ وغيره، 2021). . اهڙيءَ طرح، PCR ڪينسر جي ترقي سان لاڳاپيل ميوٽيشنز جي سڃاڻپ ڪري سگهي ٿو. ڪيترن ئي مطالعي مختلف ڪينسر ۾ مختلف ميوٽيشنز کي ڳولڻ لاءِ هن CRISPR تي ٻڌل حڪمت عملي کي اختيار ڪيو آهي (سفاري وغيره، 2019). اهڙيءَ طرح، CRISPR تي ٻڌل PCR طريقا TNBC تشخيص جي انحصار کي گهٽائي سگهن ٿا جهڙوڪ بايوپسي تي ٻڌل اميونوهسٽو ڪيمسٽري.
TNBC ۾ هارمون ريڪٽر ريگيوليشن ۾ جينوٽائپڪ تبديليون پڻ ڏيکاريون ويون آهن (چن ۽ روسو، 2009). پوائنٽ آف ڪيئر تشخيص لاءِ مائڪرو ايري استعمال ڪندي CRISPR/Cas9 تي ٻڌل PCR حڪمت عمليون انهن ميوٽيشنز کي مؤثر طريقي سان مانيٽر ڪري سگهن ٿيون (Hajian et al., 2019). اهو صحت جي سار سنڀال فراهم ڪندڙن کي TNBC مريضن ۾ مخصوص ميوٽيشنز بابت لاڳاپيل معلومات پڻ فراهم ڪري سگهي ٿو، جيڪو انهن جي علاج جي ڪورس کي بهتر بڻائڻ ۾ مدد ڪري سگهي ٿو. بهرحال، هن گڏيل ٽيڪنڪ جون حدون آهن. تنهن ڪري، TNBC جي تشخيص لاءِ صحت جي سار سنڀال ۾ هن CRISPR/Cas-PCR طريقي کي استعمال ڪرڻ کان اڳ وسيع تحقيق جي ڪوششن جي ضرورت آهي (يانگ ۽ ٻيا، 2019).